人胰岛素原突变体重组逆转录病毒及稳定包装细胞系的构建和鉴定OACSTPCD
Construction and identification of recombinant defective retroviral vector with mutant human proinsulin gene and stable virus-producing cell lines
目的构建携带人胰岛素原突变体的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系.方法采用PCR重叠延伸定点突变技术,将普通细胞内Furin蛋白酶的识别和切割位点Arg-X-Lys-Arg-样序列,引入人胰岛素原C肽两端,同时加上信号肽、Kozak序列和酶切位点并克隆至逆转录病毒载体pLXSN中,测序正确后转染包装细胞PA317,经G418筛选后挑选稳定生产病毒的细胞株,用NIH3T3细胞测定病毒滴度.结果测序证明胰岛素原cDNA的5个预定位点成功突变,其上游加上…查看全部>>
兰丽珍;邓华聪;孙辽;郑丹;弓军胜
重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆,400016重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆,400016重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆,400016重庆医科大学附属第一医院内分泌科,重庆,400016山西医科大学第一临床医学院整形科
生物科学
胰岛素原诱变,定点载体,逆转录病毒包装细胞系
《山西医科大学学报》 2004 (2)
联合表达成熟胰岛素和葡萄糖激酶HepG2细胞的构建
97-100,4
国家自然科学基金资助项目(30070356)
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