基于CRISPR/cas9系统高效编辑小鼠Galt基因OA北大核心CSCDCSTPCD
Efficient Editing of Mouse Galt Gene Based on CRISPR/cas9 System
GALT基因突变是人类I型半乳糖血症的主要病因.拟通过CRISPR/cas9系统打靶小鼠Galt基因以模拟人GALT基因突变,从而为建立精准模拟I型半乳糖血症的动物模型奠定基础.首先分析了我国I型半乳糖血症GALT基因的致病突变位点,并将其定位在小鼠Glat基因上,作为小鼠Galt基因的拟突变位点,然后根据拟突变位点区域的序列设计了sgRNA导向序列,构建sgRNA表达质粒,将其与cas9表达质粒共转染小鼠3T3细胞,通过嘌呤霉素和杀稻瘟菌素筛选阳性转染细胞,提取阳性细胞基因组DNA,PCR扩增打靶位点的DNA片段,通过TA克隆测序鉴定基因编辑情况并分析编辑效率.结果表明,3个sgRNA导向序列均可以通过CRISPR/Cas9系统高效编辑小鼠Galt基因,编辑效率为100％.
岳鹏鹏;郭俊璠;于鸿浩;付灿;王小燕;高进涛
桂林医学院生物技术学院,桂林 541000桂林医学院生物技术学院,桂林 541000桂林医学院生物技术学院,桂林 541000桂林医学院生物技术学院,桂林 541000桂林医学院生物技术学院,桂林 541000桂林医学院生物技术学院,桂林 541000
sgRNACRISPR/Cas9系统Galt基因编辑半乳糖血症
《生物技术通报》 2020 (8)
遗传性多发性外生骨疣家系中EXT基因致病突变位点鉴定及动物模型构建
235-242,8
国家自然科学基金项目(31860302),广西自然科学基金项目(2018JJA140455),广西科技计划项目(基于碱基编辑技术打靶 Galt 基因构建 I 型半乳糖血症动物模型),广西大学生创新创业训练项目(201810601023),广西中青年教师能力提升项目(30606017005)
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