非洲猪瘟病毒MGF505-5R蛋白表达与纯化OA北大核心CSTPCD
Expression and Purification of MGF505-5R Protein of African Swine Fever Virus
为了获得具有生物学活性的非洲猪瘟病毒(ASFV)MGF505-5R蛋白及其特异性多克隆抗体,分别将His-SUMO、His-TrxA、His-GST、His-MBP和His-NusA基因片段与MGF505-5R基因连接,构建原核表达载体pET28a-SUMO-MGF505-5R、pET28a-TrxA-MGF505-5R、pET28a-GST-MGF505-5R、pET28a-MBP-MGF505-5R和pET28a-NusA-MGF505-5R,并分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过对诱导剂浓度、诱导温度和诱导时间进行优化,研究最佳表达条件;采用麦芽糖亲和层析和Ni2+亲和层析对表达的重组蛋白进行纯化,并将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体;应用Western blot方法对制备的多克隆抗体进行鉴定.结果显示,MBP-MGF505-5R重组蛋白能够在大肠杆菌中可溶性表达,在20℃条件下,IPTG浓度为0.5 mmol/L、诱导12 h时,重组蛋白可溶性表达量最高;纯化后可获得纯度达90％以上的MGF505-5R蛋白.免疫小鼠后制备的多克隆抗体能够与MGF505-5R蛋白发生特异性反应.综上,利用大肠杆菌表达系统实现了ASFV MGF505-5R蛋白的可溶性表达,且纯化后重组蛋白纯度较高,具有生物学活性.
张素玲;吴芃;岳亚男;白晨雨;郝丽影;李向东;逄文强;田克恭
国家兽用药品工程技术研究中心,河南 洛阳 471003国家兽用药品工程技术研究中心,河南 洛阳 471003国家兽用药品工程技术研究中心,河南 洛阳 471003国家兽用药品工程技术研究中心,河南 洛阳 471003国家兽用药品工程技术研究中心,河南 洛阳 471003国家兽用药品工程技术研究中心,河南 洛阳 471003国家兽用药品工程技术研究中心,河南 洛阳 471003国家兽用药品工程技术研究中心,河南 洛阳 471003
农业科技
非洲猪瘟病毒MGF505-5R蛋白大肠杆菌表达系统可溶性表达纯化
《河南农业科学》 2020 (10)
130-136,7
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