腐食酪螨过敏原Tyr p 5生物信息学分析及原核表达OA北大核心CSCDCSTPCD

目的:克隆表达腐食酪螨过敏原第5组分(Tyr p 5),并了解其分子特征.方法:采用TaKaRa MiniBEST Universal RNA Extraction Kit试剂盒提取腐食酪螨总RNA,根据GenBank已公布的Tyr p 5核酸序列设计引物,用RT-PCR合成Tyr p 5编码基因并与pET-28a(+)载体连接后转入大肠杆菌E.coli BL21诱导表达,通过Ni柱亲和层析纯化得到蛋白.运用生物信息学方法预测分析Tyr p 5蛋白的结构和功能.结果:从腐食酪螨cDNA中扩增获得Tyr p 5基因片段,成功构建了表达质粒pET-28a(+)-Tyr p 5,Western blot结果显示原核表达获得成功.获得的Tyr p 5基因与参考序列同源性(GenBank AY800360)达99.8％,含有一个完整的开放阅读框,由158个氨基酸组成,信号肽位于1～36AA、跨膜区域为23～33AA,为细胞外亲水蛋白.Tyr p 5蛋白的二级结构由75.32％的α螺旋、1.9％的β转角和22.78％的无规则卷曲构成.α螺旋为Tyr p 5蛋白的主要折叠形式.其氨基酸序列与棉兰皱皮螨过敏原第5组分相似率为52.68％,分子进化树中腐食酪螨与棉兰皱皮螨聚成一簇,并与现行的形态学分类系统一致符合.结论:成功克隆、表达、纯化腐食酪螨Tyr p 5蛋白,并初步预测其分子特征.