同步分离培养大鼠肝星状细胞和枯否细胞的方法研究OA

目的 建立一种简便经济的大鼠肝星状细胞(HSCs)与枯否细胞(KCs)同步分离培养方法 ,为体外进一步研究肝纤维化机制提供细胞学基础.方法 SD大鼠麻醉后门静脉插管,链霉蛋白酶E、Ⅳ型胶原蛋白酶离体灌流,10.387％与18.8％Nycodenz密度梯度离心法分离原代HSCs、KCs.通过台盼蓝拒染实验计算所得细胞活率.采用a-SMA与Desmin抗体免疫组学鉴定HSCs.采用溶菌酶免疫细胞化学法与印度墨汁吞噬实验鉴定KCs.结果 本实验同步分离并培养大鼠原代HSCs与KCs,证实所分离培养的细胞为HSCs与KCs.每只SD大鼠的HSCs和KCs的细胞得率分别为2.0×107/肝和1.2×107/肝,HSCs纯度为93％,活率为92％,KCs纯度为91％,活率为94％.结论 本实验所用的同步分离培养原代HSCs与KCs方法 简便经济,细胞得率、活率和纯度均较高,为体外研究HSCs、KCs的生物学行为、KCs分泌细胞因子对HSCs作用提供细胞学基础.