松材线虫和拟松材线虫双重RPA检测研究OA北大核心CSCD
Duplex-RPA Detection for Bursaphelenchus xylophilus and Bursaphelenchus mucronatus
旨在建立一种以重组酶聚合酶扩增技术(RPA)为基础的快速检测方法,用于松材线虫和拟松材线虫的同步检测鉴定.根据松材线虫和拟松材线虫ITS区差异序列,分别设计松材线虫和拟松材线虫特异性上游引物Bx-rpa-F、Bm-rpa-F和两者通用下游引物Bxm-rpa-R.优化3条引物在反应体系中的最佳配比,建立双重RPA检测体系,并对其特异性和灵敏度进行分析.研究结果显示,双重RPA在37℃恒温条件反应30 min,即可完成对松材线虫和拟松材线虫核酸的同步扩增.Bx-rpa-F/Bm-rpa-F/Bxm-rpa-R对松材线虫的扩增片段为346 bp,对拟松材线虫的扩增产物为189 bp,且三者配比为5:3:8时,双重RPA扩增效果最好.双重RPA对松材线虫和拟松材线虫具有较高的检测特异性,对松材线虫的检测极限为10 pg/μL,相当于1/100条线虫,对拟松材线虫的检测极限为100 pg/μL,相当于1/10条线虫,其灵敏度低于常规PCR技术,但其满足对单条线虫检测的需求.双重RPA从松木样品中同步检测到松材线虫和拟松材线虫,操作简便、检测效率高、特异性强、灵敏度高、对仪器设备要求低,为松材线虫的检疫鉴定提供新方法.
方圆;吴迅;林宇;王海燕;吴慧平;鞠玉亮
安徽农业大学植物保护学院/植物病虫害生物学与绿色防控安徽普通高校重点实验室,合肥230036安徽农业大学植物保护学院/植物病虫害生物学与绿色防控安徽普通高校重点实验室,合肥230036天津海关动植物与食品检测中心,天津300461安徽农业大学植物保护学院/植物病虫害生物学与绿色防控安徽普通高校重点实验室,合肥230036安徽农业大学植物保护学院/植物病虫害生物学与绿色防控安徽普通高校重点实验室,合肥230036安徽农业大学植物保护学院/植物病虫害生物学与绿色防控安徽普通高校重点实验室,合肥230036
松材线虫重组酶聚合酶技术特异性灵敏度实用性
《生物技术通报》 2021 (7)
效应蛋白Mi-NUDIX1和Mi-NUDIX2调控南方根结线虫致病过程的分子机制研究
183-190,8
国家自然科学基金项目(31801714),安徽省自然科学基金项目(1808085QC80),安徽高校自然科学研究重点项目(KJ2018A0147)
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