CV-A5抗体制备及ELISA抗原检测方法的建立OA北大核心CSCD
Generation of anti-CV-A5 polyclonal and monoclonal antibodies and establish-ment of quantitative antigen ELISA
目的:制备柯萨奇病毒A组5型(CV-A5)多克隆抗体和单克隆抗体,建立CV-A5抗原定量ELISA检测方法,用于CV-A5疫苗研制中抗原定量及质量控制.方法:纯化后的CV-A5全病毒颗粒作为免疫原,制备兔多克隆抗体并免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合技术制备、中和试验和ELISA法筛选获得CV-A5单克隆抗体.建立CV-A5抗原检测方法,确定线性范围,验证其准确度、精密度、稳定性、特异性;检测CV-A5病毒颗粒纯化过程样品抗原含量.结果:制备了高效价的CV-A5兔多克隆抗体及单克隆抗体并建立ELISA抗原检测法,检测范围为15.6～1 000.0 ng/ml;高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率为88.5％～128.7％;重复性验证Cv分别为1.3％、3.2％、1.2％;中间精密度验证CV分别为2.1％、2.2％和3.5％;耐用性验证回收率为97.4％～127.6％;包被微孔板37℃放置3 d,样品回收率为101.7％～106.9％;特异性验证结果显示抗原检测方法仅识别CV-A5抗原,与CV-A5以外的抗原均无交叉反应.结论:建立的CV-A5 ELISA抗原检测法可用于纯化过程样品的抗原检测,为含CV-A5的手足口病(HFMD)多价疫苗的研制提供质量控制方法.
张小宇;靳卫平;王文辉;吴杰;卢佳;孟胜利;王泽鋆;申硕
武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室,国家联合疫苗工程技术研究中心,武汉430207武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室,国家联合疫苗工程技术研究中心,武汉430207武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室,国家联合疫苗工程技术研究中心,武汉430207武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室,国家联合疫苗工程技术研究中心,武汉430207武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室,国家联合疫苗工程技术研究中心,武汉430207武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室,国家联合疫苗工程技术研究中心,武汉430207武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室,国家联合疫苗工程技术研究中心,武汉430207武汉生物制品研究所有限责任公司病毒性疫苗研究一室,国家联合疫苗工程技术研究中心,武汉430207
医药卫生
柯萨奇A组5型多克隆抗体单克隆抗体双抗体夹心ELISA抗原检测方法
《中国免疫学杂志》 2021 (11)
1346-1351,6
本文受国家"重大新药创制"科技重大专项(2015ZX09102021)2017湖北省技术创新专项(2017ACA078)资助.
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