五种检测嵌合抗原受体表达方法的比较OA北大核心CSCDCSTPCD
Comparison of 5 Methods of Evaluating the Expressions of Chimeric Antigen Receptors
比较检测新型嵌合抗原受体(CAR)的5种方法.通过慢病毒感染得到稳定表达嵌合抗原受体的细胞.使用免疫球蛋白G抗体染色、蛋白质L染色、绿色荧光蛋白共表达法、实时荧光定量PCR的绝对定量和相对定量法5种方法检测不同嵌合抗原受体在Jurkat细胞中的表达.成功构建6种CAR慢病毒表达载体(Meso-CAR、Met-CAR、R132H-CAR1-2-GFP、R132H-CAR2-4-GFP、Dupixent-HL-CAR-GFP、Dupixent-LH-CAR-GFP),并得到其对应的CAR稳定表达Jurkat细胞.发现Meso-CAR和Met-CAR可同时用免疫球蛋白G抗体和蛋白质L染色鉴定其表达(免疫球蛋白G抗体染色效果较优),而其余4种CAR均不可以.对荧光法染色不可行的CAR可使用绿色荧光蛋白共表达法、实时荧光定量PCR的绝对定量和相对定量法间接检测CAR的表达,3种方法的结果之间存在一定的对应性.不同的CAR分子,可用不同方法确定细胞中CAR分子的表达情况.
王欢禹;常昊宛;章崇祺;金卫林;魏芳
上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240上海交通大学生命科学技术学院,上海 200240
嵌合抗原受体免疫球蛋白G抗体蛋白质L绿色荧光蛋白实时荧光定量PCR
《生物技术通报》 2021 (12)
265-273,9
国家自然科学基金面上项目(81772166)
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