微小RNA-31-5p调控蛋白激酶Cε通路在远程缺血预处理保护兔脊髓缺血再灌注损伤中的作用机制OACSTPCD

目的 探讨微小RNA-31-5p(miR-31-5p)在远程缺血预处理(RIPC)保护兔脊髓缺血再灌注损伤(SCIRI)中的作用及其机制.方法 将60只日本大耳白兔分为假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组、RIPC组、RIPC+ miR-NC组、RIPC+ miR-31-5p mimic组,每组12只.采用夹闭腹主动脉30 min建立SCIRI模型,通过鞘内注射miR-31-5p mimic质粒构建miR-31-5p过表达模型,除sham组和I/R组外,其余各组于闭腹主动脉前1h实施RIPC.再灌注48 h后,对动物进行后肢运动功能评分和血-脊髓屏障(BSCB)通透性检测;苏木精-伊红(HE)染色观察脊髓组织形态学变化;TUNEL检测脊髓组织神经元凋亡情况;逆转录-实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测脊髓组织miR-31-5p和蛋白激酶Cε(PKCε)和脑源性神经营养因子(BDNF)的mRNA表达;Western Blot检测脊髓组织PKCε、BDNF蛋白表达.结果 与sham组相比,I/R组后肢运动功能评分降低,伊文思蓝(EB)含量、神经元凋亡率增加,差异有统计学意义(P＜0.05),且脊髓神经元数量减少,空泡化明显,胞核固缩;与I/R组相比,RIPC组后肢运动功能评分、PKCε和BDNF的mRNA和蛋白表达增加,EB含量、神经元凋亡率、miR-31-5p表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05),且正常神经元明显增多,少数细胞空泡变性,核仁明显;使用miR-31-5p mimic上调miR-31-5p的表达可显著减弱RIPC对兔SCIRI的保护作用(P＜0.05).结论 miR-31-5p的表达在RIPC后降低,并可通过激活PKCε蛋白,上调脊髓组织中BDNF的表达,减轻SCIRI.