微小RNA-182-5p通过靶向MAPK1调控MAPK/NF-κB通路治疗急性肺损伤的研究OA

目的 通过分子生物学手段探讨微小RNA-182-5p(miR-182-5p)对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)的影响及其分子机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测LPS诱导的ALI模型miR-182-5p和丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)表达.双荧光素酶报告基因检测用于检测miR-182-5p与MAPK1的关系.ALI模型分别给予Ad-MAPK1、Ad-miR-182-5p和Ad-MAPK1+Ad-miR-182-5p,而后采用苏木精-伊红染色法(HE染色)和Masson染色检测肺损伤指数和肺纤维化改变情况.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各处理组肺组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和髓过氧化物酶(MPO)水平.采用蛋白质印迹法(WB)检测核因子κB(NF-κB)和NF-KB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达.结果 本研究显示miR-182-5p表达水平在ALI后0～12 h逐渐升高,＞12～24 h下降;MAPK1表达则在0～12 h逐渐下降,＞12～24 h出现升高.进一步行基因干扰的ALI结果显示,miR-182-5p过表达能够显著下调肺损伤指数、肺纤维化评分和促炎细胞因子水平,而MAPKI的过表达上调了肺损伤指数、肺纤维化评分和促炎细胞因子水平.体外细胞实验结果显示,LPS刺激显著增加NF-κB的蛋白质表达,同时抑制IκBα的表达.miR-182-5p能够抑制NF-κB的表达而促进IκBα的表达;相反,MAPK1过表达则逆转了这一现象.结论 miR-182-5p通过抑制MAPK/NF-κB信号通路在ALI中发挥治疗作用,本研究数据或可有助于深入了解ALI的潜在分子机制和ALI治疗新方法的开发.