奶牛乳房炎6种主要致病菌多重PCR检测方法的建立及初步应用OA

为了同时检测奶牛乳房炎中的6种主要致病菌,本试验分别针对金黄色葡萄球菌的nuc基因、无乳链球菌的ef-tu基因、绿脓杆菌的eta基因、停乳链球菌的16srRNA基因、致病性大肠杆菌的Phoa基因、牛支原体的opp D/F基因设计合成了6对特异性引物。在建立并验证单一PCR的基础上,构建多重PCR反应体系,对其反应体系进行优化,验证了该方法的特异性和敏感性。结果表明,该6重PCR检测方法对奶牛乳房炎的其他病原菌没有特异性扩增,对牛支原体、致病性大肠杆菌、停乳链球菌、绿脓杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌最低检出终浓度分别为1.1×10^(5)、1.41×10^(6)、1.6×10^(3)、3×10^(5)、3.8×10^(4)和7.3×10^(3)拷贝/μL。对采集的宁夏地区98份临床乳房炎病例乳样的检测结果显示:牛支原体、致病性大肠杆菌、停乳链球菌、绿脓杆菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌的检出率分别为10.2%(10/98)、14.2%(14/98)、14.2%(14/98)、12.2%(12/98)、18.3%(18/98)、18.3%(18/98)。本研究建立的多重PCR检测方法具有良好的特异性及敏感性,可用于奶牛乳房炎6种主要致病菌的检测及流行病学调查。