靶向IL-6慢病毒介导RNA干扰实验性基因治疗类风湿关节炎OA北大核心CSTPCD

目的:探讨靶向小鼠IL-6基因RNA干扰慢病毒载体颗粒(LV-IL-6-RNAi)对小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞IL-6表达的影响,及其对胶原诱导性关节炎(CIA)的治疗作用。方法:设计合成3对特异性针对小鼠IL-6基因的小干扰RNA(siRNA)序列,筛选最高效siRNA序,构建高效LV-IL-6-RNAi。LV-IL-6-RNAi感染小鼠巨噬细胞株J774A.1细胞,并设慢病毒阴性对照(LV-NC-RNAi)、培养基空白对照,RT-qPCR检测J774A.1细胞的IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-1βmRNA相对表达水平,以检测LV-IL-6-RNAi体外干扰效率。取DBA/小鼠构建CIA模型并随机分为4组:LV-IL-6-RNAi组、LV-NC-RNAi组、甲氨蝶呤(MTX)阳性对照组、PBS空白对照组,分别关节腔注射LV-IL-6-RNAi、LV-NC-RNAi、腹腔注射MTX、PBS溶液,记录CIA小鼠关节炎评分,ELISA检测小鼠IL-6、IL-1β和TNF-α血清水平,组织病理检测炎症关节的炎症细胞浸润数。结果:成功构建了高效LV-IL-6-RNAi。在体外J774A.1细胞水平上,LV-IL-6-RNAi组IL-6 mRNA相对表达水平显著低于LV-NC-RNAi组、培养基空白对照组(F=33.47,P<0.01),而IL-1β和TNF-αmRNA相对表达水平组间差异无统计学意义(P>0.05)。首次免疫注射牛Ⅱ垂胶原后第28~35天成模,成模率为96.43%。首次免疫注射后第35天,CIA-LV-IL-6-RNAi组关节炎评分开始降低,首次免疫注射后第42天,CIA-LV-IL-6-RNAi组关节炎评分显著低于CIA-LV-NC-RNAi、CIA-PBS组(F=10.05,P<0.01),而CIA-LV-IL-6-RNAi组与CIA-MTX组差异无统计学意义(t=0.19,P=0.85)。CIA-LV-IL-6-RNAi组IL-6、IL-1β及TNF-α血清水平显著低于CIA-PBS组、CIA-LV-NC-RNAi组(F值分别为87.29、18.20、30.79;P均<0.01);而CIA-LV-IL-6-RNAi组与CIA-MTX组IL-6、IL-1β及TNF-α血清水平差异无统计学意义(P均>0.05)。CIA-LV-IL-6-RNAi组和CIA-MTX组炎症关节病理切片高倍镜下炎症细胞的浸润数量均显著少于CIA-LV-NC-RNAi组和CIA-PBS组(F=141.80,P<0.01),但CIA-LV-IL-6-RNAi组和CIA-MTX组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功构建的高效LV-IL-6-RNAi可作为类风湿关节炎(RA)实验性基因治疗的有效手段。