凝血酶抑制剂亭扎肝素对肺癌血管生成的抑制作用及分子机制研究OA

目的 探讨凝血酶抑制剂亭扎肝素对肺癌血管生成的抑制作用及分子机制.方法 使用不同浓度(10、20、50、100 U/L)亭扎肝素处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并分组,同时设置对照组(不加亭扎肝素),采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法和Transwell实验分别检测各组细胞活力和细胞迁移情况.通过体外试管形成实验、网络形成试验和主动脉环试验进一步验证亭扎肝素的体外、体内抗血管生成作用,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测HUVEC和HCC827细胞中对照组与20 U/L亭扎肝素组的凝血酶含量和血管内皮生长因子(VEGF)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、蛋白激酶B(Akt)蛋白含量.通过HCC827异种移植物进一步验证亭扎肝素的抗肿瘤和抗血管生成作用,检测对照组与20 U/L亭扎肝素组的肿瘤质量、肿瘤体积.采用免疫组化方法检测肿瘤组织中Ki-67、CD31和血管内皮生长因子A(VEGFA)表达情况,并检测肿瘤组织中的凋亡细胞.结果 CCK-8法和Tranwell实验发现,20 U/L亭扎肝素可有效抑制HUVEC的细胞活力和细胞迁移.网络形成试验显示,相较于对照组,20 U/L亭扎肝素可有效抑制HUVEC的管形成,差异有统计学意义(P＜0.05).主动脉环测定结果显示,相较于对照组,20 U/L亭扎肝素减少了血管生成,抑制了 CAM模型中的新血管形成,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot检测结果显示,HUVEC和HCC827细胞中,20 U/L亭扎肝素组的凝血酶含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);HCC827细胞中,20 U/L亭扎肝素组的VEGF、p-Akt和Akt蛋白含量均低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).HCC827异种移植物验证结果显示,20 U/L亭扎肝素组的肿瘤质量、肿瘤体积均小于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01);与对照组比较,20 U/L亭扎肝素可抑制肿瘤增殖,促进肿瘤细胞凋亡,并抑制血管生成.结论 亭扎肝素可降低凝血酶的表达,抑制细胞增殖和血管生成,促进肺癌细胞凋亡,其抗血管生成作用与Akt及其下游信号通路的失活有关.