解淀粉芽胞杆菌不同整合位点对外源碱性蛋白酶表达的影响OA北大核心CSCDCSTPCD

为探究基因组上不同整合位点对外源碱性蛋白酶表达的影响,基于解淀粉芽胞杆菌TCCC 111018基因组信息,通过预测基因组上复制起始位点OriC确定了yaah基因整合位点;与此同时,通过分析6个胞外蛋白酶基因(epr、vpr、mpr、apr、bpr和nprE)单独缺失后对外源碱性蛋白酶酶活力的影响,并对发酵上清液中主要分泌蛋白的分析和质谱鉴定,确定了nprE和amyE基因位置为另外两个整合位点。在确定的3个整合位点处分别整合克劳氏芽胞杆菌来源的碱性蛋白酶基因aprE,并对整合菌株的碱性蛋白酶酶活力进行对比分析,结果表明整合菌株解淀粉芽胞杆菌18-ΔY∷aprE和18-ΔN∷aprE碱性蛋白酶酶活力分别达到784.36 U/mL和1289.09 U/mL,分别比原始菌株提高了15%和88.9%,实时荧光定量PCR和SDS-PAGE凝胶电泳表明18-ΔN∷aprE的碱性蛋白酶的转录水平和表达量均最高,这表明在nprE基因位点整合碱性蛋白酶基因可以有效提高碱性蛋白酶表达量,为进一步构建工业酶生产菌株奠定了基础。