基于二维高效液相色谱法测定两性霉素B血药浓度OA

目的基于二维高效液相色谱法建立两性霉素B血药浓度的测定方法。方法第一维色谱柱采用Aston SX1色谱柱(3.5 mm×25.0 mm,5.0μm),流动相V_(甲醇)∶V_(乙腈)∶V_(水)(25.0 mmoL/L磷酸铵盐水溶液)=1∶3∶3,流速0.7 mL/min;第二维色谱柱采用Aston SCB色谱柱(4.6 mm×125.0 mm,5.0μm),流动相V_(水)(25.0 mmol/L磷酸铵盐水溶液)∶V_(水)(1.0 mmol/L磷酸氢二铵溶液)∶V_(甲醇)∶V_(乙腈)=10∶35∶10∶45,流速1.0 mL/min;中间柱采用Aston SCB色谱柱(4.6 mm×10.0 mm,3.5μm),辅助流动相为纯水。检测波长380 nm,柱温40℃,进样体积300μL。结果两性霉素B在0.059~12.31μg/mL与峰面积线性关系良好(r=0.9999),最低定量限为0.04μg/mL,检测限为0.01μg/mL,方法回收率为98.79%~99.39%,提取回收率为98.50%~99.00%,日内精密度、日间精密度的相对标准偏差(RSD)均小于3.00%。结论基于二维高效液相色谱法的两性霉素B血药浓度测定法具有灵敏度高、重现性好、自动化程度高、样品处理简单等特点,符合血清样品的检测要求,可应用于临床患者的两性霉素B血药浓度监测。