检测肺炎支原体新方法的建立及应用OACSTPCD

目的 建立成簇的规律间隔的短回文重复序列(CRISPR)-Cas12a技术结合环介导等温扩增(LAMP)单管一步法快速检测肺炎支原体(Mp),并探讨其在临床诊断中的应用价值。方法 设计并优化Mp LAMP引物,根据LMAP产物靶标设计Cas12a CrRNA。分析CRISPER-LAMP单管一步法检测Mp DNA的灵敏度;检测Mp、甲流病毒(FluA)、乙流病毒(FluB)、肺炎克雷伯菌(Kp)和肺炎链球菌(Sp)及50例临床样本,评估CRISPER-LAMP单管一步法的特异性。结果 CRISPER-LAMP单管一步法可在1 h内实现Mp DNA的可视化检测,检出限为10 fg/μL,聚合酶链式反应(PCR)法检出限为100 fg/μL;CRISPER-LAMP单管一步法检测FluA、FluB、Kp和Sp结果均为阴性;50例临床样本检测结果均与临床诊断结果相符,且CRISPER-LAMP与PCR法一致性较好(Kappa=1)。结论 CRISPER-LAMP单管一步法检测Mp简便、快速、灵敏度高,且特异性强,检测不需任何特殊设备,检测过程中无气溶胶污染,其有望成为快速检测Mp的新方法。