广谱性识别H7亚型禽流感病毒HA蛋白的单克隆抗体制备与鉴定OA北大核心CSTPCD
Preparation and Identification of Monoclonal Antibody Broadly Recognizing HA Protein of H7 Subtype Avian Influenza Virus
H7N9亚型禽流感病毒(AIV)的快速进化与变异使得其逃脱现有抗体的识别,为提供H7亚型AIV鉴别诊断所需重要材料,制备可识别H7亚型AIV HA蛋白的单克隆抗体(mAb).采用差速离心法纯化的H7N9亚型AIV(A/Chicken/Guangdong/SW154/2015)免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备杂交瘤细胞,采用血凝抑制(HI)试验、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接ELISA检测方法筛选阳性杂交瘤细胞株.结果显示,获得5株稳定分泌抗H7N9 AIV HA蛋白mAb的杂交瘤细胞,腹水ELISA效价均为1:1000000;其中,4株mAb的重链为IgG1,1株mAb的重链为IgG2b,轻链均为κ链.特异性测定结果显示,5株mAb仅与H7亚型AIV反应,不与其他亚型流感病毒发生反应;广谱性测定结果显示,5株mAb均可与不同年份分离出的H7亚型AIV发生反应;HI结果显示,腹水针对H7-Re3抗原株的HI效价为7 log2～12 log2;MDCK细胞微量中和试验结果显示,5株mAb均具有中和活性;Dot blot检测结果显示,5株mAb均可识别H7-Re2抗原株和H7-Re3抗原株;Western blot检测结果表明,5株杂交瘤细胞培养上清均在63 ku附近出现1条特异性的蛋白质条带,说明这5株mAb均识别线性表位.综上,成功制备了5株广谱性识别H7 AIV HA蛋白的单克隆抗体.
王勋;李鸽;李青梅;吕镕州;孟泽锟;柴书军;杨继飞;郭军庆;张改平
河南农业大学 动物医学院,河南 郑州 450002河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002西北农林科技大学 动物医学院,陕西 杨凌 712100河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002河南农业大学 动物医学院,河南 郑州 450002河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002河南农业大学 动物医学院,河南 郑州 450002河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002河南省农业科学院 动物免疫学重点实验室,河南 郑州450002
农业科技
禽流感病毒H7N9单克隆抗体广谱性中和活性
《河南农业科学》 2022 (11)
119-126,8
河南省农业科学院科技创新团队项目(2022TD02)河南省科技攻关项目(212102110091)
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