新冠病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立OA
【目的】为了实现对新冠病毒一步法检测。【方法】采用RT-LAMP技术,利用具有反转录酶活性的Bst3.0 DNA聚合酶,以新冠病毒N蛋白基因为模板设计LAMP引物,成功建立了以新冠N蛋白基因为靶基因的RT-LAMP检测方法。同时对反应条件中的温度、镁离子浓度、NTP浓度、甜菜碱浓度以及酶浓度进行优化。通过加入钙黄绿素和氯化锰显色剂对反应结果进行判定,用ASFV p54质粒和JEV NS1质粒与稀释后模板做对照。【结果】温度为66℃,镁离子浓度为6mmol/L,甜菜碱浓度为1 mol/L,NTP为1.4 mmol/L,酶浓度为160 U/L为最优反应条件。【结论】证明了Bst3.0 DNA聚合酶对新冠N蛋白基因检测是成功的,该方法具有良好的特异性以及灵敏度。
刘树荣;陶飞飞;熊园翔;温林;郭韫丽;孔令保
江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌330045江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌330045江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌330045江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌330045 江西农业大学南昌市动物病毒与基因工程重点实验室,江西南昌330045江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌330045 江西农业大学南昌市动物病毒与基因工程重点实验室,江西南昌330045江西农业大学生物科学与工程学院,江西南昌330045 江西农业大学南昌市动物病毒与基因工程重点实验室,江西南昌330045
医药卫生
新型冠状病毒环介导等温扩增技术可视化
《生物灾害科学》 2022 (4)
P.415-422,8
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