瑞香狼毒降低YAP1表达抑制肝癌细胞增殖的作用OACSTPCD

探讨瑞香狼毒(Stellera chamaejasme L.,SCL)抑制肝癌细胞增殖的效应和机制,为原发性肝细胞癌的病理机制研究和临床治疗提供依据.SCL含药血清处理HepG2215 细胞 24 h,CCK-8 法分析肝癌HepG2215 细胞增殖活力.Western blot分析肝癌HepG2215 细胞中Yes关联蛋白 1(yes-associated protein 1,YAP1)表达的情况;应用N-亚硝基二乙胺(diethylnirtosamine,DEN)/组成型雄甾烷受体激动剂(3,5-dichloro-2-[4-(3,5-dichloropyridin-2-yl)oxyphenoxy]pyridine,TCPOBOP)诱导肝细胞特异性Yap1 敲除(Yap1LKO)小鼠和Yap1flox/flox小鼠构建肝原位癌模型;SCL水煎液灌胃 7 d,取出肝脏,观察肝脏肿瘤大体形态;H&E染色观察肝脏肿瘤组织病理形态,Western blot分析肝脏肿瘤组织中YAP1的表达.细胞试验结果表明,SCL抑制HepG2215细胞的增殖,并降低了YAP1 的表达水平.动物试验结果表明,SCL能减小Yap1flox/flox和Yap1LKO小鼠肝原位癌肿瘤体积和肝肿瘤中YAP1 的表达水平.在NS组中,与Yap1flox/flox小鼠相比,Yap1LKO小鼠肝原位癌肿瘤体积减小了.在SCL组中,与Yap1flox/flox小鼠相比,Yap1 敲除减弱了SCL抑制肿瘤增长的作用.利用LC-MS检测SCL含药血清和水煎液的活性成分,并与YAP1 蛋白进行分子对接.LC-MS结果显示,SCL的 4 种活性成分是 3-硫酸咖啡酸、5-苄恶唑-2-酮、3,4,5-三羟基-6-[(2-氧代-2H-铬-5-基)氧]氧烷-2-羧酸和异东莨菪内酯.其中,3-硫酸咖啡酸、3,4,5-三羟基-6-[(2-氧代-2H-铬-5-基)氧]氧烷-2-羧酸和异东莨菪内酯这 3 种主要活性成分能直接结合YAP1.这些结果说明,SCL抑制肝癌细胞增殖与降低YAP1 表达有关.