利用酵母双杂交系统筛选水稻中与OsCRK5互作蛋白OACSCDCSTPCD
Screening of OsCRK5-interacted Proteins in Rice Using Yeast Two-hybrid System
水稻是重要的粮食作物,研究水稻生长发育调控机制可为水稻品种改良奠定理论基础.钙依赖蛋白激酶(calcium dependent protein kinases,CDPKs)是植物中重要的蛋白激酶,参与植物生长发育以及对环境反应的应答.水稻中的CRK5(CDPK-related kinase 5)在蛋白序列和结构上与CDPK高度同源.为进一步研究OsCRK5 在水稻干旱反应中的功能,本研究利用酵母双杂交筛库技术筛选了OsCRK5 的互作蛋白.首先将OsCRK5 的 1-1 332 bp片段克隆至pGBKT7 载体中,获得诱饵载体pGBKT7-OsCRK5,经测序无误后,转化至酵母菌株Y2H Gold中.在营养缺陷培养基中观察到重组蛋白不具有毒性作用及自激活活性,同时利用Western blot分析重组蛋白的表达.进一步利用水稻cDNA文库筛选OsCRK5 的互作蛋白,共得到 77 个阳性克隆.功能预测结果显示,互作蛋白涉及蛋白质合成、贮存和降解过程、转录调控、植物细胞生长和分裂过程、能量代谢和细胞代谢等方面的功能.最后,从阳性克隆中选取参与植物干旱胁迫应答的两个蛋白OsWR1 和OsDi19-1,利用酵母双杂交和双分子荧光互补的方法验证其与OsCRK5 的相互作用.研究结果为水稻抗旱的遗传改良奠定了基础.
王子颖;龙晨洁;范兆宇;张蕾
武汉大学生命科学学院 杂交水稻国家重点实验室,武汉 430072武汉大学生命科学学院 杂交水稻国家重点实验室,武汉 430072武汉大学生命科学学院 杂交水稻国家重点实验室,武汉 430072武汉大学生命科学学院 杂交水稻国家重点实验室,武汉 430072
水稻OsCRK5酵母双杂交cDNA文库干旱胁迫
riceOsCRK5yeast two-hybrid systemcDNA librarydrought stress
《生物技术通报》 2023 (9)
水稻OsWDRP通过BR信号转导系统调节株高的分子机制研究
117-125,9
国家自然科学基金项目(31570288)
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