S100A4基因载体的构建及其在人胃癌细胞系中的表达OACSTPCD

目的 克隆S100A4 cDNA,构建pcDNA3.1-S100A4重组表达载体,转染胃癌细胞系MKN1,观察S100A4在胃癌细胞中的表达情况.方法 Trizol法提取人胃上皮细胞GES-1的总RNA,逆转录反应获得含S100A4基因的cDNA.聚合酶链反应GenBank获得S100A4基因序列,并设计引物,利用聚合酶链反应(PCR)扩增出分子量为327 bp的产物.构建pMD18-T simple-S100A4重组质粒,转化JM109菌.菌液测序成功后,提取质粒,进行BamH Ⅰ/Hind Ⅲ双酶切,酶切产物回收纯化,连接表达载体pcDNA3.1,构建pcDNA3.1-S100A4真核表达载体.利用脂质体介导转染方法将纯化的表达载体转染到胃癌细胞系MKN1中,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后MKN1细胞中S100A4 mRNA表达水平.结果 PCR产物连接克隆载体的测序结果与GenBank公布的无突变序列一致,Hind Ⅲ/BamH Ⅰ双酶切可以成功构建真核表达载体pcDNA3.1-S100A4;在胃癌细胞系MKN1中转染pcDNA3.1-S100A4表达载体,以转染pcDNA3.1空载体和正常未转染的MKN1细胞作为对照.结果表明,转染pcDNA3.1-S100A4表达载体48 h后,S100A4 mRNA表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 构建完成pcDNA3.1-S100A4真核表达载体,S100A4基因在胃癌细胞MKN1中成功表达.