温和灸足三里穴对自然衰老大鼠肾组织p16 DNA甲基化的影响OACSTPCD

目的 观察温和灸足三里穴对自然衰老大鼠肾组织p16 DNA甲基化的调控作用及潜在机制。方法 将Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为12月龄组、24月龄组和艾灸组。24月龄组和艾灸组制备自然衰老模型。12月龄组和24月龄组大鼠不予治疗,待相应时间取材;艾灸组采用温和灸足三里穴至24月龄取材。采用免疫荧光法观察3组大鼠肾组织衰老相关标志物β-半乳糖苷酶的表达。采用酶联免疫吸附法和免疫组织化学法检测3组大鼠肾组织衰老相关p16蛋白及甲基转移酶[甲基转移酶3a(DNA methyltransferase 3a,Dnmt3a)和甲基转移酶3b(DNA methyltransferase 3b,Dnmt3b)]蛋白的表达。采用定量反转录聚合酶连锁反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测3组大鼠肾组织端粒长度、肾组织衰老相关p16 mRNA及甲基转移酶(Dnmt3a和Dnmt3b) mRNA表达。采用重亚硫酸盐测序技术检测3组大鼠肾组织p16 DNA CpG岛甲基化程度。结果 与12月龄组比较,24月龄组大鼠肾组织β-半乳糖苷酶表达、端粒长度的损耗及衰老相关p16蛋白和mRNA表达水平升高(P<0.05),24月龄组大鼠肾组织Dnmt3a和Dnmt3b蛋白及mRNA表达水平降低(P<0.05)。与24月龄组比较,艾灸组大鼠肾组织β-半乳糖苷酶表达、端粒长度的损耗及肾组织衰老相关p16蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.05),艾灸组大鼠肾组织Dnmt3a和Dnmt3b蛋白及mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论温和灸可通过影响自然衰老大鼠肾组织衰老相关甲基转移酶的表达调控p16 DNA CpG岛整体甲基化水平,降低肾组织p16蛋白及mRNA在衰老机体肾组织的表达,延缓肾组织衰老进程。