GW0742对凝血酶诱导的体外血脑屏障破坏的保护作用OACSTPCD

目的探讨GW0742对凝血酶诱导的体外血脑屏障破坏的保护作用。方法选取新生3~7日龄的SD大鼠若干,提取原代脑微血管内皮细胞(BMEC)及星形胶质细胞(AC)。于体外构建BMEC单层培养模型和BMEC+AC共培养模型,分为BMEC单层培养模型组、BMEC+AC共培养组及Blank组(只加培养基);取体外血脑屏障(BBB)共培养模型,分为Control组和脑出血组(ICH组),Control组加入完全培养基处理,ICH组加入40 u/mL凝血酶处理,分别处理12 h模拟体外ICH模型,并通过4 h渗漏试验、荧光素钠通透性试验评价BBB及ICH模型的通透性。另取BBB共培养模型大鼠分成5个组:Control组、ICH组,以及GW0742低、中、高剂量组(1.25、2.50、5.00μmol/L),给药24 h后采用Western blotting检测MMP-9、ZO-1、Occludin蛋白表达。结果4 h渗漏试验结果显示:与Blank组比较,BMEC单层培养组能维持一定的液面差;与BMEC单层培养组比较,BMEC+AC共培养组能维持较好的液面差。荧光素钠通透性试验结果显示各组通透性为:Blank组>BMEC单层培养组>BMEC+AC共培养组。荧光素钠通透性试验结果显示:与Blank组比较,BMEC单层培养组在0.5、1.0、2.0 h时通透性降低(P<0.05);与BMEC单层培养组比较,BMEC+AC共培养组在0.5、1.0、2.0 h时通透性降低(P<0.05)。4 h渗漏试验结果显示:与Control组相比,ICH组液面差降低,通透性增加。荧光素钠通透性试验结果显示:与Control组比较,ICH组在0.5、1.0、2.0 h时通透性增加(P<0.05)。细胞形态学观察结果显示:与Control组比较,ICH组内皮细胞形态明显皱缩、拉长;与ICH组比较,给药组内皮细胞形态未见明显皱缩、拉长,呈剂量依赖。与Control组比较,ICH组MMP-9蛋白相对表达量升高(P<0.05),ZO-1、Occludin蛋白相对表达量降低(P<0.05);与ICH组比较,GW0742高剂量组MMP-9蛋白相对表达量降低(P<0.05),ZO-1、Occludin蛋白相对表达量升高(P<0.05)。结论GW0742对凝血酶诱导的血脑屏障破坏具有保护作用,其保护作用可能与抑制MMP-9的过度表达及促进紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达有关。