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G6P[1]型牛轮状病毒的分离培养及鉴定OA北大核心CSTPCD

中文摘要

目的从轮状病毒阳性的牛粪便标本中,分离出一株G6P[1]型牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV),对其进行培养和鉴定。方法用PBS溶液重悬粪便标本并离心,将其上清过滤除菌和胰酶处理后,利用MA104细胞进行分离培养;通过逆转录-聚合酶链式反应(Reverse Transcription-polymerase Chain Reaction,RT-PCR)对样本VP4和VP7基因进行扩增和测序,与GenBank上的参考序列进行同源性分析,构建进化树,分析确定其G/P基因分型。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Polyacrylamine Gel Electrophoresis,PAGE)、噬斑实验和电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)等技术对分离到的病毒进行鉴定和纯化。绘制病毒生长动力学曲线。结果分离培养了1株BRV毒株,将其命名BLL。VP7和VP4基因测序结果显示此毒株为G6P[1]型轮状病毒。PAGE胶结果显示分离株电泳型为长型,条带呈现A组轮状病毒排列电泳图谱;通过噬斑实验将毒株进行了纯化。电镜检测到典型的轮状病毒颗粒。病毒生长动力学曲线可发现病毒在感染后6 h已经开始复制。结论本研究成功分离到G6P[1]型牛型轮状病毒,为研究G6P[1]型轮状病毒的病原学特征提供实验基础和技术参考。

王铭月;张锦华;章青;孔翔羽;王宏;孙晓曼;李丹地;庞立丽;段招军;

甘肃中医药大学公共卫生学院,兰州730000 传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室,国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京102206传染病溯源预警与智能决策全国重点实验室,国家卫生健康委员会医学病毒和病毒病重点实验室,中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所,北京102206

基础医学

轮状病毒G6P[1]分离噬斑实验纯化序列分析

《中国人兽共患病学报》 2024 (002)

P.134-139 / 6

国家重点研发计划(No.2021YFC2301000)。

10.3969/j.issn.1002-2694.2024.00.019

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