FMDV 3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用OA北大核心CSTPCD
本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用。根据GenBank序列合成3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测3D蛋白在细胞内的表达及定位。通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50等试验检测HEK-293T细胞中过表达3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响。结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制。本研究为深入探究3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础。
苗勤;吴香菊;齐静;丛晓燕;李均同;王林;杜以军;
山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018 山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,山东济南250100 农业农村部畜禽生物组学重点实验室,山东济南250100山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,山东济南250100 农业农村部畜禽生物组学重点实验室,山东济南250100山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018
畜牧业
口蹄疫病毒3D蛋白真核表达Ⅰ型IFN信号通路
《山东农业科学》 2024 (002)
P.144-150 / 7
国家自然科学基金项目(32373094,32102710);山东省自然科学基金项目(ZR2021ZD08,ZR2023MC076,ZR2021MC139);国家兽用生物制品工程技术研究中心开放课题(GTKF(23)009);国家重点研发计划项目(2021YFD1800300)。
评论