红花清肝十三味丸通过抑制炎性细胞浸润改善小鼠肝损伤的研究OACSTPCD

[目的]研究蒙药红花清肝十三味丸(HHQG)通过抑制炎性细胞浸润改善小鼠肝损伤的作用机制。[方法]选取6~8周龄的雄性C57BL/6小鼠54只,随机分为对照组、模型组和HHQG保肝组,每组18只。HHQG保肝组连续7 d每天灌胃1次HHQG,剂量为0.6165 g/(kg·BW),对照组和模型组每天灌胃1次等体积的生理盐水;第7天灌胃4 h后,对照组腹腔注射剂量为0.1 mL/(10 g·BW)的橄榄油,模型组和HHQG保肝组均腹腔注射等剂量的CCl_(4)与橄榄油混合物(CCl_(4)∶橄榄油=1∶4,V/V)。肝损伤造模后第2、5、7天,通过检测血清谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活力、观察肝脏组织病理学变化(HE染色及Masson染色),评价肝损伤模型制备是否成功以及HHQG对肝损伤的缓解作用;通过免疫组织化学技术检测肝脏组织中性粒细胞和单核/巨噬细胞浸润情况;应用免疫组织化学技术和反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析肝脏组织中炎性因子TNF-α的表达情况;运用转录组测序(RNA-seq)及RT-qPCR技术分析HHQG对肝脏组织中黏附分子基因表达的影响。[结果]综合多项评价指标,模型组小鼠出现明显的肝损伤症状,提示CCl_(4)诱导的肝损伤模型制备成功。与模型组相比,肝损伤后第2天,HHQG保肝组小鼠血清中AST和ALT活力极显著(P<0.01)降低。HHQG可减少肝损伤区域中性粒细胞和单核/巨噬细胞等炎性细胞浸润,缓解胶原纤维物质沉积,通过促进肝细胞增殖进行组织修复。HHQG保肝组小鼠肝损伤区域TNF-α表达量减少;与模型组相比,肝损伤后第2、7天以及第5天,HHQG保肝组的肝脏组织中TNF-α基因的mRNA相对表达量分别极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)降低。转录组数据分析表明,HHQG可显著下调肝损伤后与中性粒细胞和单核/巨噬细胞浸润相关的黏附分子基因群;RT-qPCR验证试验结果显示,与模型组相比,肝损伤后第5、7天,HHQG保肝组的肝脏组织中VCAM-1基因的mRNA相对表达量极显著(P<0.01)降低;肝损伤后第2天以及第5、7天,HHQG保肝组的肝脏组织中ICAM-1基因的mRNA相对表达量分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)降低。[结论]HHQG通过减少以中性粒细胞和单核/巨噬细胞为主的炎性细胞浸润,下调肝损伤区炎性因子TNF-α的表达,以及抑制黏附分子的表达,减轻肝损伤后发生的炎症,从而发挥抗炎保肝作用。