三种抗氧化剂对斑马鱼卵母细胞冷冻保存效果比较OA

为研究抗氧化剂对斑马鱼卵母细胞冷冻保存效果的影响,在基础冷冻保护液配方中分别添加褪黑素、谷胱甘肽和甜菜碱等3种抗氧化剂进行了冷冻保存试验,比较冷冻后卵母细胞的活性氧(ROS)含量、总抗氧化能力(T-AOC)、腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量、琥珀酸脱氢酶(SDH)活性、凋亡基因表达水平和存活率。试验结果显示:经过筛选,3种抗氧化剂的最优添加浓度分别为褪黑素1×10^(-3) mol/L、谷胱甘肽5×10^(-4) mol/L、甜菜碱1×10^(-3) mol/L。与对照组相比,添加最优浓度抗氧化剂的3个试验组(褪黑素组、谷胱甘肽组和甜菜碱组)的ROS含量均显著降低,ATP含量和SDH活性均显著提高,褪黑素组和甜菜碱组的T-AOC水平显著提高(P<0.05);褪黑素组卵母细胞的caspase3、caspase9和bax基因表达量显著降低,bcl-2基因表达量则显著升高(P<0.05);谷胱甘肽组卵母细胞的caspase3基因表达量显著下降,bcl-2基因表达量显著上升(P<0.05);甜菜碱组卵母细胞的caspase9和bax基因表达量显著降低(P<0.05)。复苏后的卵母细胞在体外培育120 min,褪黑素组、谷胱甘肽组、甜菜碱组卵母细胞的存活率分别比对照组提高10.13%、14.20%和15.99%;冷冻保存1、7、30、60、90 d,3个试验组卵母细胞的存活率均显著高于对照组(P<0.05);冷冻保存90 d,褪黑素组、谷胱甘肽组、甜菜碱组的存活率分别提高了9.05%、7.34%、6.68%。试验结果说明,在斑马鱼卵母细胞冷冻保存过程中添加1×10^(-3) mol/L褪黑素或5×10^(-4) mol/L谷胱甘肽或1×10^(-3) mol/L甜菜碱,均能够增强冷冻保存后卵母细胞的线粒体功能,降低细胞氧化应激水平,减少细胞凋亡,从而提高斑马鱼卵母细胞冷冻效率。