lncRNA NEAT1通过抑制hsa-miR-450b-5p促进胃癌细胞中EZH2的表达与细胞的增殖和迁移能力OA北大核心CSTPCD

目的:筛选果蝇Zeste基因增强子同源物2(EZH2)基因上游miRNA及lncRNA,分析其在胃癌细胞中的表达并验证其间的靶向关系,探讨它们对胃癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法:通过ENCORI、miRDB和Target Scan数据库查询并分析、筛选EZH2上游miRNA(has-miR-450b-5p),ENCORI数据库和DAINA数据库筛选has-miR-450b-5p上游lncRNA(lncRNA NEAT1),预测hsa-miR-450b-5p、lncRNA NEAT1与EZH2之间的结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证hsa-miR-450b-5p与lncRNA NEAT1的结合关系。采用q PCR和WB法检测lncRNA NEAT1和EZH2在正常胃黏膜细胞(GES-1)与胃癌细胞(MGC-803、SGC-7901和MKN-28)中的表达量。按转染物的不同将MGC-803和SGC-7901细胞分为hsa-miR-450b-5p-mimic组、mimicNC组、si-NEAT1组和si-NC组,转染36~48 h后qPCR法验证过表达及敲减效果;通过qPCR、WB法检测观察过表达hsa-miR-450b-5p对细胞中lncRNANEAT1和EZH2m RNA、蛋白表达的影响,以及敲减lncRNANEAT1对hsa-miR-450b-5p和EZH2mRNA表达的影响;CCK-8法、划痕愈合实验和流式细胞术分别检测敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1对细胞增殖、迁移和凋亡能力的影响。结果:生物信息学分析筛选获得EZH2上游miRNA和lncRNA为has-miR-450b-5p和lncRNA NEAT1,双荧光素酶报告基因实验验证了两者间存在靶向关系。lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA、蛋白在胃癌细胞中均呈高表达(均P<0.05)。与mimic-NC组相比,hsa-miR-450b-5p-mimic组MGC-803、SGC-7901细胞中miR-450b-5p水平均显著升高,而EZH2 mRNA、蛋白和lncRNA NEAT1的表达量均显著降低(P<0.05或P<0.01);与si-NC组相比,si-NEAT1组MGC-803、SGC-7901细胞中lncRNA NEAT1和EZH2 mRNA的表达量均显著降低(均P<0.01),SGC-7901细胞中hsa-miR-450b-5p表达量显著升高(P<0.05)。敲减EZH2或敲减lncRNA NEAT1后,MGC-803、SGC-7901细胞的增殖、迁移能力均显著降低(均P<0.01)。结论:lncRNA NEAT1和EZH2在胃癌细胞中均呈高表达,lncRNA NEAT1可通过hsa-miR-450b-5p促进EZH2的表达并提高胃癌MGC-803和SGC-7901细胞的增殖和迁移能力。