氯化锂通过PI3K/Akt信号通路调控牙髓干细胞成牙本质向分化的研究OACSTPCD

目的 探讨Wnt/β-连环素(β-catenin)通路激活剂氯化锂对牙髓干细胞(DPSCs)分化能力的影响及其相关分子机制。方法 体外培养DPSCs,通过茜素红染色评估不同浓度氯化锂(1和10 mmol/L)刺激DPSCs 1、2周后矿化结节的形成情况;采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测1 mmol/L氯化锂对DPSCs成牙本质标志基因[牙本质涎磷蛋白(DSPP)、牙本质基质蛋白1(DMP1)、碱性磷酸酶(ALP)、骨涎蛋白(BSP)、骨钙素(OCN)的mRNA]表达的影响;采用LY294002抑制磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路,通过茜素红染色和RT-qPCR验证其对DPSCs矿化结节形成及成牙本质标志基因表达的影响。进一步通过Western blot分析1 mmol/L氯化锂加或不加LY294002 (25μmol/L)刺激DPSCs对其下游Akt磷酸化表达的影响。结果 与0 mmol/L氯化锂相比,1 mmol/L氯化锂可明显促进DPSCs矿化结节形成和DSPP、DMP1、BSP、ALP mRNA的表达(P<0.05),而10 mmol/L氯化锂则抑制矿化结节形成(P<0.05)。加入LY294002 (25μmol/L)培养DPSCs 2周后,抑制了氯化锂(1 mmol/L)刺激导致的矿化结节形成增加和DSPP、DMP1、ALP mRNA的表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,氯化锂(1 mmol/L)能够明显促进Akt的磷酸化(P<0.05),并具有时间依赖性,而LY294002可明显抑制Akt的磷酸化(P<0.05)。结论 氯化锂可通过调控PI3K/Akt信号通路调控DPSCs的成牙本质向分化过程。