白芷在神经病理性疼痛中对MrgprD-TRPA1通路的调控作用分析OA北大核心CSTPCD

目的本研究拟通过建立坐骨神经慢性缩窄损伤(chronic constriction injury,CCI)小鼠模型,分析和探讨白芷在神经病理性疼痛中的镇痛效果及其对MrgprD-TRPA1信号通路的调控作用。方法无菌外科手术结扎缠绕30只小鼠坐骨神经制备CCI小鼠模型;VonFrey实验检测白芷对小鼠机械刺激疼痛行为学变化,热辐射实验评估白芷对小鼠热痛觉过敏情况;Western Blot、免疫荧光、RT-PCR检测白芷对小鼠MrgprD和TRPA1蛋白表达水平、DRG阳性神经元数量、MrgprD和TRPA1 mRNA水平的影响;通过对HEK293细胞分别单转染和共转染MrgprD、TRPA1质粒后的钙成像实验,分析荧光信号强度差异性。结果共成功制备了25只CCI小鼠模型,造模率达到83.33%(25/30);白芷灌胃的CCI小鼠机械性阈值和缩足潜伏时间均显著大于对照组(P<0.05);白芷灌胃的CCI小鼠中MrgprD和TRPA1蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.05);白芷灌胃的CCI小鼠DRG中MrgprD和TRPA1阳性神经元的数量显著低于对照组(P<0.05);白芷灌胃的CCI小鼠中MrgprD和TRPA1 mRNA相对表达水平均显著低于对照组(P<0.05);共转染MrgprD和TRPA1质粒的HEK293细胞中荧光强度显著高于单转染和对照组(P<0.05)。结论本研究通过探究白芷在CCI小鼠模型中镇痛的效果,证明了MrgprD-TRPA1是神经病理性疼痛的重要作用靶点,揭示了白芷可以通过调控MrgprD-TRPA1信号转导通路来抑制神经病理性疼痛程度,这为后续开发新型临床镇痛药物及镇痛机制的深入研究奠定了基础。