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猪源Rab基因shRNA文库与稳定细胞株的构建及其对猪伪狂犬病病毒增殖的影响OA北大核心CSTPCD

中文摘要

【目的】探究Rab家族蛋白在猪伪狂犬病病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)感染宿主细胞中的作用。【方法】以猪肾上皮细胞(PK15)为试验模型,构建Rab基因shRNA文库,并用嘌呤霉素筛选获得稳定的能够抑制猪源Rab基因表达的细胞株。用实时荧光定量PCR检测细胞敲减效率,通过流式细胞术检测敲减Rab基因对PRV增殖的影响;用Western blotting检测PRV-gB蛋白表达量,使用实时荧光定量PCR检测敲减Rab基因后PRV-gB、PRV-TK基因以及相关细胞炎性因子表达量。【结果】试验成功构建包含13种Rab基因敲减细胞系的shRNA文库。流式细胞术检测结果显示敲减Rab基因能显著抑制PRV-GFP增殖(P<0.05);病毒滴度与Western blotting检测结果表明,敲减Rab基因极显著抑制子代病毒的产生以及PRV-gB蛋白的表达(P<0.01)。实时荧光定量PCR检测结果显示,敲减Rab基因会显著或极显著抑制PRV-gB、PRV-TK基因表达(P<0.05;P<0.01);敲减Rab14和Rab27基因后细胞中IFN-β、ISG15、IL-1β、IL-18基因表达量均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01)。【结论】敲减Rab基因能够抑制PRV增殖。研究结果为进一步研究Rab基因在PRV生活周期中发挥的作用奠定基础。

梁东阁;姚晨;柴雅静;蔡梦攀;褚贝贝;鲁维飞;王江;曾磊;刘忠虎;明胜利;

河南农业大学动物医学院,郑州450046河南农业大学动物医学院,郑州450046 河南农业大学,农业农村部动物生化与营养重点开放实验室,郑州450046 河南农业大学,河南省动物生长发育调控重点实验室,郑州450046

畜牧业

Rab基因猪伪狂犬病病毒(PRV)慢病毒shRNA文库

《中国畜牧兽医》 2024 (003)

P.1250-1258 / 9

河南农业大学高层次人才专项支持基金(30501322)。

10.16431/j.cnki.1671-7236.2024.03.037

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