华蟾素通过抑制谷胱甘肽合成酶表达诱导肝癌细胞发生铁死亡的作用机制研究OACSTPCD

目的研究华蟾素(cinobufotalin)通过抑制谷胱甘肽合成酶(glutathione synthetase,GSS)表达诱导肝癌细胞发生铁死亡的作用机制。方法不同浓度华蟾素(0、2、4、6、8μg·mL^(-1))分别与铁螯合剂(deferoxamine,DFO)50μmol·L^(-1)或还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)5 mmol·L^(-1)联合处理肝癌细胞48 h,采用CCK-8检测细胞活性。采用活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和GSH检测试剂盒检测华蟾素(8μg·mL^(-1))干预后肿瘤细胞内ROS、MDA和GSH含量。通过实时荧光定量PCR(QRT-PCR)和Western blotting检测华蟾素处理对肝癌细胞GSS表达的影响。并采用RNA干扰技术探究在肝癌细胞中GSS对GSH含量及肝癌细胞增殖的影响。结果与单独使用华蟾素相比,铁螯合剂DFO能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用。与对照组相比,华蟾素干预组能够增加肿瘤细胞内的ROS和MDA含量,降低GSH含量。同时,研究显示GSH能够部分逆转华蟾素对肝癌细胞的增殖抑制作用。深入机制研究发现,华蟾素能够抑制GSS蛋白表达。RNA干扰实验的结果表明,下调GSS蛋白表达能够降低GSH水平。敲低GSS能够削弱DFO对华蟾素增殖抑制的逆转作用,且敲低GSS能够在一定程度上抑制肝癌细胞的生长,并增强华蟾素的增殖抑制作用。结论华蟾素能够诱导肝癌细胞发生铁死亡,其机制与干预GSS水平有关。该研究为华蟾素临床应用提供理论基础,并对中药抗肿瘤新药开发起到积极的推动作用。