龙胜凤鸡TBX5基因克隆、生物信息学分析及过表达载体构建OA北大核心CSTPCD
试验旨在探究TBX5(T-box Transcription Factor 5)基因在有、无毛脚鸡品种不同组织中的表达模式,并对其进行克隆、生物信息学分析及过表达载体构建.利用QRT-PCR检测TBX5基因在有、无毛脚鸡不同组织中的相对表达量;通过PCR扩增获得TBX5的CDS序列,并利用生物信息学软件对其序列及蛋白结构进行分析;通过双酶切构建TBX5过表达载体并利用QRT-PCR检测TBX5过表达效率.结果表明,相比广西麻鸡(鳞片脚),TBX5基因在龙胜凤鸡(毛脚)胫部特异性高表达;龙胜凤鸡TBX5基因CDS区全长1 566 bp,共编码 521 个氨基酸,与参考序列相比,存在 3 处同义突变及 1 处错义突变(c.296A>G引起蛋氨酸变为丙氨酸);同源性分析表明龙胜凤鸡TBX5基因与其他禽类的同源性均在 92.8%以上;TBX5 蛋白属于不稳定亲水性蛋白,不存在跨膜结构域和信号肽,蛋白二级结构由α-螺旋、β-折叠、延伸链及无规则卷曲组成,三级结构主要由无规则卷曲及延伸链构成.本试验成功构建了pEGFP-TBX5 过表达载体,QRT-PCR结果显示TBX5在过表达组极显著高于对照组.本研究结果为后续探究TBX5基因在鸡毛脚性状中的作用提供了理论基础.
刘雍翠;杜文娅;杨祝良;杨雪琴;袁虹;李福球;黎剑能;杨秀荣
广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530004广西贵港市港丰农牧有限公司,广西贵港 537100广西大学动物科学技术学院,广西南宁 530004||广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室,广西南宁 530004
畜牧业
龙胜凤鸡TBX5基因生物信息学分析过表达载体
《中国畜牧杂志》 2024 (005)
167-171 / 5
广西重点研发计划(桂科AB21075010)
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