PRRSV GP4蛋白的原核表达及单克隆抗体的制备OA北大核心CSTPCD

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)给养猪业带来巨大经济损失,尽快建立该病毒的快速诊断方法尤为重要。PRRSV ORF4基因编码的结构蛋白GP4为病毒感染所必须。本研究为制备GP4单克隆抗体,选取ORF4优势序列优化合成,连入pET-32a原核表达载体,构建重组质粒pET-32a-ORF4;经双酶切验证后,转化至BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并纯化;经SDS-PAGE及Westernblot鉴定成功后免疫小鼠,制备筛选单克隆抗体,对制备的单克隆抗体进行验证。结果表明,GP4蛋白以可溶形式表达,大小为30 kDa;纯化蛋白免疫小鼠后,共筛选4株IgG亚型阳性杂交瘤细胞株;所制备单克隆抗体可与抗原特异性结合。本研究为PRRSV诊断方法的建立及后续研究奠定了基础。