RIPK3在LPS/D-GalN诱导急性肝衰竭中的作用研究OACSTPCD

目的研究受体相互作用蛋白激酶3(receptor-interacting protein kinases 3,RIPK3)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)/D-氨基半乳糖(D-galactosamine,D-GalN)诱导的急性肝衰竭(acute liver failure,ALF)中的作用。方法体内实验使用SPF级雄性BALB/c小鼠15只,随机分为对照组(Control),模型组(LPS/D-GalN),抑制剂预处理组(GSK872+LPS/D-GalN),每组5只。ALF动物模型采用LPS联合D-GalN腹腔注射的方式制备。药物腹腔注射前1 h,分别以0.1%DMSO和RIPK3特异性拮抗剂GSK872(溶于0.1%DMSO)尾静脉注射进行预处理。肝损伤程度采用血生化检测和肝脏组织学变化来评估;基因mRNA表达采用PCR检测,蛋白表达采用蛋白质印迹和免疫组化分析。结果动物实验结果显示,与正常对照组(Control)相比,模型组(LPS/D-GalN)小鼠肝组织见显著炎症出血坏死性损伤,肝内F4/80+细胞浸润增多,血清ALT和AST水平明显升高(P_(均)<0.01)。同时,肝组织F4/80、Mcp-1、Tnf-α、Il-6、Ripk3和Mlkl mRNA,以及RIPK3蛋白和p-MLKL/MLKL蛋白比值均上调,差异均存在统计学意义(P_(均)<0.05)。与模型组相比,预处理组(GSK872+LPS/D-GalN)小鼠肝脏炎症损伤程度明显减轻,肝内F4/80+细胞浸润明显减少,且血清ALT和AST水平显著下降(P_(均)<0.01)。肝组织F4/80、Mcp-1、Tnf-α、Il-6、Ripk3和Mlkl mRNA,以及RIPK3蛋白和p-MLKL/MLKL蛋白比值下调,差异均有统计学意义(P_(均)<0.05)。结论在LPS/D-GalN联合诱导的小鼠急性肝衰竭模型中,RIPK3抑制剂的应用可能直接通过靶向肝细胞,减少肝细胞的坏死性凋亡,从而减少巨噬细胞浸润,最终改善肝脏炎症状态。这提示RIPK3可能通过对肝细胞坏死性凋亡通路分子的影响促进ALF的发生和发展。