沉默HMGB1通过抑制p38 MAPK信号通路减少LPS或IL-17A诱导的中耳腔上皮细胞的炎症与凋亡OACSTPCD

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(High Mobility Group Protein 1,HMGB1)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)诱导人中耳腔上皮细胞(human middle ear epithelial cells,HMEEC)的炎症反应与凋亡的调控作用与机制。方法:培养HMEEC细胞系。将HMEEC分为对照组、LPS组、LPS联合短发夹RNA(shRNA)沉默质粒阴性对照处理组(LPS+shNC组)、LPS联合shRNA沉默HMGB1处理组(LPS+shHMGB1组)、LPS联合p38-丝裂原激活的蛋白激酶(p38 MAPK)抑制剂SB202190处理组(LPS+SB202190组)、IL-17A组、IL-17A+shNC组、IL-17A+shHMGB1组、IL-17A+SB202190组。酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测TNF-α、IL-1β和IL-6的水平变化。用Western blot检测粘蛋白5AC(mucoprotein 5AC,MUC5AC)、粘蛋白8(mucoprotein 8,MUC8)、p38 MAPK、磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK)、E26样蛋白1(E-twenty-six like 1 protein,ELK1)、B细胞淋巴瘤2蛋白(B-cell lymphoma 2 protein,Bcl-2),以及Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)的表达。流式细胞术检测细胞的凋亡。结果:与对照组比,LPS组或IL-17A组的HMEEC的凋亡率都增加,且HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平升高,而Bcl-2的表达水平降低(均P<0.05)。与LPS组或IL-17A组比,LPS+shHMGB1组或IL-17A+shHMGB1组的凋亡率都降低,且HMGB1、MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都减少,而Bcl-2的表达水平升高(均P<0.05)。与LPS组或IL-17A组比,LPS+SB202190组或IL-17A+SB202190组的的凋亡率都降低,MUC5AC、MUC8、TNF-α、IL-1β、IL-6、p38、p-p38、ELK1、Bax的表达水平都降低,而Bcl-2的表达水平升高(均P<0.05)(均P<0.05)。结论:沉默HMGB1通过抑制p38 MAPK信号通路减少LPS或IL-17A诱导的HMEEC的炎症与凋亡。