喀什地区某规模化引种场奶牛感染隐孢子虫的PCR检测与种系发育分析OACSTPCD

[目的]掌握新疆维吾尔自治区喀什地区某规模化引种场奶牛的隐孢子虫(Cryptosporidium)感染情况及其种类分布特征。[方法]采集该场不同年龄段奶牛粪便样本190份,基于小亚基核糖体RNA基因(SSU rDNA),采用PCR方法检测隐孢子虫感染情况,经序列比对鉴定隐孢子虫种类。利用卡方(χ^(2))检验法,比较不同年龄段奶牛隐孢子虫感染率的差异。采用PCR方法扩增微小隐孢子虫(C.parvum)、牛隐孢子虫(C.bovis)和芮氏隐孢子虫(C.ryanae)的gp60基因,经序列比对鉴定3种隐孢子虫的基因亚型,构建种系发育树解析其遗传进化特征。[结果]32份奶牛粪便样本呈隐孢子虫阳性,总体感染率为16.84%(32/190);鉴定出4种隐孢子虫,分别为微小隐孢子虫(n=8)、安氏隐孢子虫(C.andersoni,n=10)、牛隐孢子虫(n=10)和芮氏隐孢子虫(n=4)。以3月龄以下断奶前犊牛的隐孢子虫感染率较高,为28.00%(14/50),不同年龄段奶牛隐孢子虫的感染率差异显著(χ^(2)=8.679,P<0.05)。8份微小隐孢子虫阳性样本成功获得7条gp60基因亚型序列,鉴定出2种亚型,分别为ⅡdA15G1亚型(n=3)和ⅡdA19G1亚型(n=4);10份牛隐孢子虫阳性样本成功获得6条gp60基因亚型序列,鉴定出3种亚型,分别为ⅩⅩⅥb(n=2)、ⅩⅩⅥc(n=3)和ⅩⅩⅥe(n=1);4份芮氏隐孢子虫阳性样本均成功获得gp60基因亚型序列,均为ⅩⅩⅠb亚型。种系发育树分析结果显示,获得的微小隐孢子虫Ⅱd基因亚型序列与不同宿主源微小隐孢子虫Ⅱd亚型家族的序列同处于一个亚群,而与新西兰不同宿主源微小隐孢子虫Ⅱa家族亚型的序列形成不同亚群;获得的牛隐孢子虫和芮氏隐孢子虫的亚型序列均与我国不同地区牛源牛隐孢子虫和芮氏隐孢子虫的亚型序列同处一个大群。[结论]该引种场奶牛感染的隐孢子虫存在遗传多样分布特征,均为引进当地后感染,提示水源和草料污染可能是该场奶牛感染隐孢子虫的主要原因。