鸡NLRP3蛋白表达、多克隆抗体制备与初步应用OA
为探究禽病病原触发炎症的分子机制,通过克隆和分析鸡源NLRP3基因,原核表达和纯化了NLRP3蛋白,随后用纯化的NLRP3蛋白免疫小鼠制备了NLRP3多克隆抗体,对该抗体进行了ELISA效价检测,并初步测试了该抗体在间接免疫荧光试验(IFA)和Westerm blot试验中的应用效果。结果显示:成功表达重组蛋白NLRP3,其相对分子质量约87kDa,能与His标签抗体发生特异性结合反应;成功制备鸡NLRP3蛋白多克隆抗体,其ELISA效价高达1:32000;Western blot和IFA检测中,NLRP3多克隆抗体可与NLRP3原核表达蛋白和真核表达蛋白发生特异性反应,还可检测到由IBDV触发的以及LPS刺激产生的巨噬细胞HD11内源性NLRP3蛋白的上调表达。结果表明,制备的鸡NLRP3蛋白多克隆抗体免疫原性较好、效价较高。本试验为进一步研究禽病病原诱发炎症的分子机制提供了重要工具。
许萌萌;黄萌萌;王国栋;于航博;韩京哲;牛鑫鑫;张玉龙;韩金泽;刘润杭;吴子文;于晓雪;王笑梅;高玉龙;李留安;祁小乐;
中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,动物疫病防控全国重点实验室禽免疫抑制病创新团队,黑龙江哈尔滨150069 天津农学院动物科学与动物医学学院,天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津300392中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,动物疫病防控全国重点实验室禽免疫抑制病创新团队,黑龙江哈尔滨150069天津农学院动物科学与动物医学学院,天津市农业动物繁育与健康养殖重点实验室,天津300392
畜牧业
NLRP3原核表达多克隆抗体炎症检测
《中国动物检疫》 2024 (007)
P.96-103 / 8
国家自然科学基金项目(U20A2061、32072852);黑龙江省重点研发计划项目(GA21B004);“十四五”国家重点研发计划项目(2022YFD1800300)。
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