线粒体功能障碍在青光眼视网膜神经节细胞凋亡中的作用OA北大核心CSTPCD

目的探讨青光眼视神经损伤中线粒体功能改变及其在视网膜神经节细胞(RGCs)凋亡中的作用。方法在标准大气压环境(100 kPa;1 kPa=7.5 mmHg)下,利用压力装置额外予以70 mmHg的气体压力培养RGC-5细胞,按照不同培养时间将RGC-5细胞分为12 h组、24 h组、48 h组。并将标准大气压下培养的RGC-5细胞设为空白组。通过Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,JC-1染色及DCFH-DA荧光探针染色分别检测RGC-5细胞线粒体膜电位(MMP)及细胞内活性氧(ROS)水平。Western blot检测细胞内B淋巴细胞瘤-2(BCL-2)蛋白、BCL-2相关X蛋白(BAX)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase-3)及胞质内细胞色素C(Cyt C)蛋白的表达变化。结果与空白组相比,12 h组、24 h组、48 h组细胞内MMP均显著下降(均为P<0.05)。与空白组相比,24 h组、48 h组细胞凋亡率、ROS水平均显著增加(均为P<0.05),12 h组细胞凋亡率、ROS水平差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与空白组相比,24 h组、48 h组细胞内cleaved Caspase-3及BAX蛋白相对表达量均显著增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05),12 h组细胞内cleaved Caspase-3、BAX蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与空白组相比,12 h组、24 h组、48 h组细胞内BCL-2蛋白相对表达量均显著下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与空白组相比,48 h组胞质内Cyt C蛋白相表达量显著增加(P<0.05),12 h组、24 h组胞质内Cyt C蛋白相对表达量差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论RGC-5细胞在70 mmHg压力下培养后,表现出细胞凋亡增加及线粒体功能障碍。压力损伤早期线粒体损伤机制可能与外源性细胞凋亡途径密切相关。