缺血性视网膜损伤致细胞凋亡的内质网应激机制研究OA北大核心CSTPCD

目的分析缺血对视网膜神经节细胞(retinalganglioncells,RGCs)凋亡过程中内质网应激(endoplasmicreticulumstress,ERS)相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucoseregulatedprotein78,GRP78)、增强子结合蛋白同源蛋白(C/BEBPhomologousprotein,CHOP)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)-12表达的影响,探究缺血性视网膜损伤(ischemic retinal injury,IRI)致RGCs凋亡的分子水平发病机制,为预防和治疗IRI提供新的思路和方法。方法应用前房高眼压法制作大鼠右眼IRI模型。健康雄性SD大鼠40只,按照缺血时间的不同分为正常对照组、IRI30 min组、IRI60 min组以及IRI120 min组,每组各10只。应用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察不同分组中大鼠视网膜组织形态学变化;应用免疫组织化学(immunohistochemical,IHC)染色法观察不同分组中细胞凋亡相关因子B细胞原癌基因-2(B-cell lymphocyte/leukemia-2,Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)和Caspase-3的表达及定位情况;应用免疫荧光(immunofluorescence,IF)染色法观察不同分组中ERS相关蛋白GRP78、CHOP和Caspase-12的表达及定位情况。结果HE染色结果显示,与正常对照组相比,IRI各组可见视网膜水肿,视网膜内层厚度增加,视网膜细胞分布紊乱,RGCs数量减少,空泡组织增多。IHC染色结果显示,正常对照组视网膜中仅有少量Bax、Caspase-3蛋白表达,IRI各组中Bax、Caspase-3蛋白主要表达于神经节细胞层和内核层,与正常对照组相比,IRI各组视网膜中Bax、Caspase-3蛋白表达量明显增加,且IRI各组间差异也具有统计学意义。正常对照组视网膜神经节细胞层和内核层中可见大量Bcl-2蛋白表达,与正常对照组相比,IRI各组视网膜中Bcl-2蛋白表达量明显减少,且IRI各组间差异具有统计学意义。IF染色结果显示,正常对照组视网膜中GRP78、CHOP、Caspase-12阳性表达较少,与正常对照组相比,IRI各组视网膜神经节细胞层和内核层中GRP78、CHOP、Caspase-12阳性表达均显著增多,且差异有统计学意义。结论IRI可诱导视网膜发生细胞凋亡,其机制可能与ERS相关通路激活有关。