吗啡后处理经miR-9-5p/HSP90调控线粒体自噬减轻心肌缺血再灌注损伤的机制研究OACSTPCD

目的深入挖掘吗啡后处理(M postC)保护心肌缺血再灌注损伤(MI/RI)心肌的分子作用机制。方法选取42只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、假手术组、MI/RI组、MI/RI+M postC组。建立MI/RI小鼠模型并给予M postC。2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色检测小鼠心肌梗死体积。Ca^(2+)Green-5N荧光探针法检测小鼠左心室心肌组织来源线粒体通透性转换孔(mPTP)的开放。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测左心室心肌组织中miR-9-5p和热休克蛋白90(HSP90)AA mRNA水平。Western blot试验检测左心室心肌组织中HSP90AA蛋白质及线粒体自噬相关蛋白因子PINK1和E 3泛素连接酶的蛋白质水平。生物信息学分析、双荧光素酶报告基因分析验证miR-9-5p和HSP90AA的序列互作。结果与假手术组比较,MI/RI组心肌梗死体积百分比增大,差异有统计学意义(P<0.05);与MI/RI组比较,MI/RI+M postC组心肌梗死体积百分比降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与假手术组比较,MI/RI组的T组Ca^(2+)水平信号升高(P<0.05);与MI/RI组比较,MI/RI+M postC组的T组Ca^(2+)水平信号降低至基线水平(P<0.05)。与假手术组比较,MI/RI组左心室心肌组织miR-9-5p RNA相对表达水平升高(P<0.05),HSP90AA mRNA和蛋白质相对表达水平均降低(P<0.05),PINK1和E 3泛素连接酶蛋白质相对表达水平均升高(P<0.05)。与MI/RI组比较,MI/RI+M postC组左心室心肌组织miR-9-5p RNA相对表达水平降低(P<0.05),HSP90AA mRNA和蛋白质相对表达水平均升高(P<0.05),PINK1和E 3泛素连接酶蛋白质相对表达水平均升高(P<0.05)。与共转染miR-9-5p mimic和HSP90AA-MUT的细胞比较,共转染miR-9-5p mimic和HSP90AA-WT的细胞内荧光素酶活性降低,差异无统计学意义(P>0.05)。结论M postC经miR-9-5p/HSP90轴可促进线粒体自噬,减轻心肌缺血再灌注损伤。