冬虫夏草多糖的结构表征及改善胞葬功能障碍的作用与机制研究OA北大核心CSTPCD

基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPAR-γ)探究冬虫夏草多糖(Cordyceps polysaccharides,CSP)对改善巨噬细胞胞葬功能的作用及机制。采用水提醇沉法提取CSP;利用高效液相凝胶色谱法、PMP柱前衍生高效液相色谱法、甲基化法分析CSP的分子量分布、单糖组成及糖苷键连接类型。通过CCK-8法、实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和流式细胞术分别测定CSP对巨噬细胞细胞活力、胞葬相关基因及胞葬功能的影响;采用间接免疫荧光法观察CSP对PPAR-γ的表达量和核定位的影响;利用小干扰RNA转染技术验证PPAR-γ在CSP改善胞葬功能中的作用。结果显示,CSP的总糖含量为72.9%,分子量分布为21.9、2100 kDa及大于50000 kDa;主要由葡萄糖、半乳糖和甘露糖三种单糖组成,含6种主要糖苷键。与模型组相比,CSP处理提高了胞葬相关基因TAM酪氨酸激酶受体(Tyro3/Axl/Mer receptor tyrosine kinase,TAM)和乳脂球表皮生长因子8(Milk fat globule-epidermal growth factor 8,Mfge8)的表达(P<0.05)以及巨噬细胞对凋亡细胞的胞葬能力(P<0.05)。免疫荧光结果表明CSP促进了PPAR-γ的蛋白表达(P<0.001)与核转位。敲低PPAR-γ后,逆转了CSP对巨噬细胞胞葬相关基因表达的促进作用。本研究表明CSP可能通过激活PPAR-γ信号通路增强氧化型低密度脂蛋白(Oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导的小鼠巨噬细胞胞葬作用。