基于Fh010935蛋白的绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测方法的建立OA北大核心CSTPCD

利用肝片吸虫(Fasciola hepatica)重组蛋白Fh010935建立绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测方法。首先烧制胶体金溶液,对胶体金溶液pH,SPA标记量进行优化,透射电镜鉴定金标蛋白。然后优化检测(T)线重组蛋白Fh010935包被浓度、质控(C)线抗SPA抗体包被浓度,制备胶体金免疫层析试纸。最后评价试纸条的敏感性、特异性、重复性和保存期,并对内蒙古地区绵羊血清样品进行检测。结果表明:K_(2)CO_(3)最适浓度为0.4 mmol/L,SPA最佳标记量为6μg/mL,T线Fh010935重组蛋白最佳包被浓度为0.25 mg/mL,C线最佳包被浓度为8倍稀释抗SPA抗体。性能试验表明,该方法最低血清稀释度为1∶160,与绵羊捻转血矛线虫、双腔吸虫、新孢子虫感染血清无免疫交叉反应,重复性良好,4℃和常温放置保存期均达到180 d。对内蒙古地区64份绵羊血清样品进行检测,阳性率为14.1%。以肝片吸虫重组蛋白Fh010935为包被抗原建立的绵羊肝片吸虫感染胶体金免疫层析试纸检测法具有良好的敏感性、特异性和重复性,保存期较长,可用于绵羊肝片吸虫感染的快速检测及流行病学调查。