干扰FABP4基因对绵羊子宫内膜上皮细胞脂质积累及迁移的影响OA北大核心CSTPCD

研究旨在探究脂肪酸结合蛋白4(FABP4)基因对绵羊子宫内膜上皮细胞脂质积累及迁移的影响。设计3条FABP4干扰片段,将片段与pGBplv-U6-mcherry-puro连接构建干扰载体,以空载质粒为对照(NC组),3条干扰重组质粒分别为FABP4-shRNA1、FABP4-shRNA2、FABP4-shRNA3,对重组质粒进行酶切鉴定。质粒转染后RT-qPCR鉴定干扰效率,Western Blot对载体干扰效果进行进一步验证。将载体转染至体外培养的子宫内膜上皮细胞中,BODIPY法检测脂滴聚集情况,使用试剂盒检测细胞中甘油三酯含量,RT-qPCR检测脂代谢及增殖迁移相关基因,细胞划痕试验检测细胞迁移情况。结果显示:所有载体均可有效干扰FABP4基因的表达,其中FABP4-shRNA2载体干扰效果最好。在干扰子宫内膜上皮细胞FABP4基因表达后,与NC组相比,细胞中脂滴聚集能力下降,甘油三酯含量降低,细胞脂质代谢和增殖迁移相关基因mRNA表达下降,划痕愈合速度降低;降低子宫内膜上皮细胞FABP4基因表达后,细胞脂质积累水平及细胞迁移能力下降。研究表明,FABP4基因可能对绵羊妊娠和胚胎正常发育具有重要作用,值得在育种实践中进行更深入研究。