日本鳗鲡心脏细胞系的建立及其在鳗鲡免疫应答研究中的应用OA北大核心CSTPCD

为建立稳定传代的鳗鲡细胞系用于鳗鲡免疫抗病机制的研究,研究利用组织块法建立了日本鳗鲡(Anguilla japonica)心脏细胞系(Anguilla japonica Heart cells,AJH)。AJH细胞在28℃、含20%胎牛血清(FBS)的DMEM/F-12培养基中培养,传代时间间隔3—4d,在第5代后更换为15%FBS传代培养。核糖体RNA基因分析显示细胞来源于日本鳗鲡。核型分析显示AJH细胞具有38条染色体,其中10条为中部着丝点染色体,10条为近中部着丝点染色体,18条为端着丝点染色体。病毒感染实验结果显示,鳗鲡疱疹病毒(Anguillad herpesvirus,AngHV)可在AJH细胞中增殖。利用多种试剂转染EGFP-AjLC3至AJH细胞,并通过流式细胞仪检测转染效率,结果显示AJH最高转染效率为(37.17±0.12)%。将AjIRF1真核表达质粒和AjIFNa、AjIFNc1启动子共转染至AJH细胞,利用双荧光素酶报告分析了过表达AjIRF1对AjIFN启动子荧光素酶活性的影响。结果显示AjIFNa和AjIFNc1启动子活性被显著上调,表明AJH细胞可用于体外的基因功能研究。经LPS刺激后,AJH细胞中AjTNF-α及AjIL-Iβ的表达水平明显上调;转染Poly I:C后,AJH细胞中AjRIG-Ia和AjRIG-Ib的表达水平明显上调,表明LPS和Poly I:C可诱导AJH细胞产生免疫应答。综上,研究所建立的日本鳗鲡心脏细胞系可为深入研究鳗鲡抗病毒、抗细菌免疫应答机制提供细胞实验模型。