Wnt/β-catenin信号通路抑制剂MSAB对人子宫内膜基质细胞纤维化反应的影响OA北大核心CSTPCD

目的:探讨Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路抑制剂3-(4-甲基苯基磺酰胺基)苯甲酸甲酯(MSAB)对人子宫内膜基质细胞(HESCs)纤维化反应的影响,为MSAB应用于宫腔粘连(IUA)靶向治疗提供依据。方法:体外培养正常HESCs,分为对照组和转化生长因子β1(TGF-β1)组;体外培养IUA患者粘连部分的HESCs,作为IUA组。采用Western blotting法检测TGF-β1作用不同时间(0、 12、 24、 48和60h)后各组细胞中纤维化标志蛋白Ⅰ型胶原α1(COL1A1)蛋白表达水平。采用MTT实验检测各组细胞增殖活性。采用Western blotting法检测对照组和IUA组细胞中细胞COL1A1、间质标志蛋白[N-钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin表达水平。根据MSAB浓度,将正常HESCs分为0(对照组)、 0.25、 0.50、 0.75和1.00μmol·L^(-1) MSAB组,MTT实验检测各组细胞存活率。MSAB作用后,将正常HESCs分为对照组(正常HESCs)、 TGF-β1组(10μg·L^(-1) TGF-β1诱导正常HESCs 24 h后撤药,更换为完全养基并继续培养24 h)和MSAB组(10μg·L^(-1) TGF-β1诱导正常HESCs 24 h后撤药,更换为含0.75μmol·L^(-1) MSAB的完全培养基并继续培养24 h)。采用实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组细胞中上皮-间质转化(EMT)相关转录因子Snail、Slug、Smuc、 ZEB1和ZEB2和COL1A1mRNA表达水平,采用Westernblotting法检测各组细胞中COL1A1蛋白、 N-钙黏蛋白、 α-SMA蛋白、 β-catenin和c-myc蛋白表达水平。结果:与对照组(TGF-β1作用0 h)比较,TGF-β1组作用12、24、48和60 h时HESCs中COL1A1蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,IUA组和TGF-β1组HESCs增殖活性差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,IUA组HESCs中COL1A1、β-连环蛋白、N-钙黏蛋白和α-SMA蛋白表达水平升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,0.75和1.00μmol·L^(-1) MSAB组细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,TGF-β1组细胞中Snail、Slug和COL1A1 mRNA表达水平升高(P<0.05或P<0.01);与TGF-β1组比较,MSAB组细胞中Snail、Slug和COL1A1 mRNA表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,作用24 h时TGF-β1组细胞中COL1A1蛋白、N-钙黏蛋白、 α-SMA蛋白、 β-catenin和c-myc蛋白表达水平升高(P<0.01);与TGF-β1组比较,MSAB组细胞中COL1A1蛋白、 N-钙黏蛋白、 α-SMA蛋白、β-catenin和c-myc蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结结论论:MSAB可抑制体外培养HESCs的纤维化反应,该结果为MASB应用于IUA靶向治疗提供了理论基础。