小鼠细小病毒NS1蛋白的原核表达、多克隆抗体制备及其免疫原性评价OA北大核心CSTPCD

【目的】通过原核表达系统表达小鼠细小病毒(Minute virus of mice,MVM)的非结构蛋白1(nonstructural protein 1,NS1),并制备其多克隆抗体,为MVM NS1蛋白生物学功能研究及相关检测方法的建立提供研究材料。【方法】通过同源重组将MVM NS 1基因与质粒pET-N-His-C-His进行连接构建重组质粒,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达,通过不同诱导条件筛选并纯化出无需复性的可溶性蛋白。将纯化后的重组蛋白NS1免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,通过间接ELISA法测定抗体效价。采用Western blotting和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定重组蛋白的表达及免疫原性。【结果】SDS-PAGE分析显示,诱导表达的重组蛋白大小为76 ku,在诱导剂(IPTG)浓度为0.6 mmol/L、诱导温度为28℃条件下表达效果最佳。间接ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价为1∶32000。Western blotting和IFA检测结果显示,制备的NS1多克隆抗体可与NS1蛋白及MVM特异性结合。【结论】本研究成功表达并纯化获得MVM NS1重组蛋白,并制备了免疫原性良好的多克隆抗体,为进一步研究NS1蛋白生物学功能及其在MVM复制感染机制中的作用、MVM临床诊断方法的建立奠定了基础。