A型塞内卡病毒3D蛋白原核表达及多克隆抗体制备OA北大核心CSTPCD

A型塞内卡病毒(SVA)是一种无囊膜的单股正链小RNA病毒,是塞内卡病毒属的唯一成员,其感染后可引起仔猪的急性死亡和母猪水泡样病变。SVA编码的非结构蛋白3D在病毒增殖及拮抗宿主天然免疫反应中发挥着重要的作用。本研究旨在原核表达SVA 3D蛋白,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。以SVA RNA为模板,通过RT-PCR试验扩增3D基因,并将3D基因克隆至原核表达载体pCold-Ⅰ中,构建重组质粒3D-pCold-Ⅰ。将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达3D蛋白,纯化该重组蛋白后免疫BALB/c小鼠制备SVA 3D蛋白的多克隆抗体。结果显示,原核表达的SVA 3D蛋白是一种可溶性蛋白,其分子质量约为55 kDa。经Western blot和IFA试验鉴定,制备的SVA 3D多克隆抗体具有良好的反应性,本研究为SVA的基础研究和应用研究提供了工具。