黄萎病菌诱导下陆地棉酵母双杂交文库的构建及GhMAPKKK2互作蛋白的筛选OA北大核心
为了探究棉花响应黄萎病菌侵染的分子机制并筛选GhMAPKKK2的互作蛋白,以陆地棉XLZ35为材料,基于Gateway克隆技术构建了棉花黄萎病菌诱导的陆地棉酵母双杂交文库,其中初级文库和次级文库的库容分别为1.2×10^(7)和2.0×10^(7)CFU,插入片段重组率均为100%且平均长度大于1000 bp。次级文库质粒浓度为953 ng·μL^(-1),符合构建酵母文库的标准,可用于酵母双杂交筛选互作蛋白。构建了pGBKT7-GhMAPKKK2表达载体,并验证了该载体对酵母细胞无毒性且不存在自激活活性。以GhMAPKKK2为诱饵蛋白,利用酵母文库初步筛选,获得81个阳性互作蛋白,经测序对比选取6个候选蛋白,通过酵母双杂交及双分子荧光互补试验(BiFC)验证,明确了候选蛋白GhFLA与GhMAPKKK2存在互作关系。本研究结果为解析GhMAPKKK2调控棉花抗黄萎病反应分子机制及调控网络提供了重要参考。
程贯富;张文祥;郭新悦;张国帅;吕晓迪;代培红;雷建峰;李月;
新疆农业大学生命科学学院,新疆乌鲁木齐830052新疆农业大学农学院,新疆乌鲁木齐830052
植物保护学
棉花黄萎病菌酵母双杂交互作蛋白GhMAPKKK2
《核农学报》 2025 (001)
P.68-76 / 9
国家自然科学基金(32160494);新疆维吾尔自治区自然科学基金资助项目(2023D01E03);新疆维吾尔自治区“天山英才”培养计划“三农”骨干人才-农业技术推广人才项目(2023SNGGNT063);研究生科研创新项目(XJAUGRI2024030)。
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