三白草酮对UUO小鼠肾组织纤维化的抑制作用及其机制OA北大核心CSTPCD

目的探究三白草酮(Sauchinone,Sch)抑制单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction,UUO)小鼠肾组织纤维化作用及其机制。方法取雄性ICR小鼠40只,分为假手术组(Sham group)、UUO纤维化模型组(UUO-Model group)、Sch低剂量组(Sch-Low group)、Sch高剂量组(Sch-High group)以及阳性对照组(Val group)。假手术组仅分离左侧肾输尿管,不结扎。UUO纤维化模型组剥离左侧近端输尿管进行双结扎,手术后第2天开始,Sch低剂量组(10 mg/kg)、Sch高剂量组(30 mg/kg)、阳性对照组(缬沙坦100 mg/kg)分别每日灌胃1次,连续灌胃给药4周。给药结束后,检测血清中肌酐(serum creatinine,SCr)、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)以及炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平;检测肾组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyd,MDA)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;实时荧光定量逆转录PCR(reverse transcription real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测肾组织中炎症因子TNF-α、IL-6 mRNA水平;采用苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色、免疫组化法检测小鼠肾组织病理变化和胶原沉积以及转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、SMAD家族成员3(SMAD family member 3,SMAD3)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白表达情况;蛋白质免疫印记法(Western Blot)观察肾组织中胶原蛋白Ⅰ型(collagen typeⅠ,CollagenⅠ)、CTGF、SMAD3、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子-κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)蛋白表达。结果与UUO纤维化模型组比较,Sch低剂量组和Sch高剂量组小鼠血清中SCr和BUN以及TNF-α、IL-6水平显著降低(P<0.05或P<0.01);肾组织中SOD活性显著升高且MDA和ROS含量显著降低(P<0.05或P<0.01);肾组织中TNF-α、IL-6 mRNA的表达显著降低(P<0.05或P<0.01);显微镜观察肾小管肿胀系膜增生、胶原纤维沉积显著改善;免疫组化显示,肾组织中TGF-β1、SMAD3和CTGF蛋白表达显著降低;Western Blot显示CollagenⅠ、CTGF、SMAD3、NF-κB蛋白表达显著减少(P<0.05或P<0.01);同时Nrf2、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论三白草酮改善肾组织纤维化的作用,其机制可能通过抗炎症、抗氧化应激作用,调控TGF-β1/SMAD3信号通路的促纤维化蛋白的表达所介导。